配制培养基的步骤?
发布网友
发布时间：2022-04-23 16:28
共8个回答
好二三四
时间：2022-07-01 22:29
1、PDA基本培养基：马铃薯适量、琼脂适量、葡萄糖适量、水适量、pH值自然；
2、PDA综合培养基：马铃薯适量、琼脂适量、葡萄糖适量、蛋白胨适量、磷酸二氢钾适量、硫酸镁适量、维生素B12适量、水适量、pH自然。
这两种培养基制备首先将马铃署去皮，洗净，切成小块，放入锅中加水煮沸20分钟，然后用纱布过滤取其汁液，将其它称好的原料连同研碎的维生素B1放入滤液中，用清水补足，然后加热使其溶化，用玻璃棒将培养基搅均，然后分装试管。
热心网友
时间：2022-07-01 19:37
1、配制溶液
向容器内加入所需水量的一部分，按照培养基的配方，称取各种原料，依次加入使其溶解，最后补足所需水分。对蛋白胨、肉膏等物质，需加热溶解，加热过程所蒸发的水分，应在全部原料溶解后加水补足。
配制固体培养基时，先将上述已配好的液体培养基煮沸，再将称好的琼脂加入，继续加热至完全融化。并不断搅拌，以免琼脂糊底烧焦。
2、调节pH值
用pH试纸（或pH电位计、氢离子浓度比色计）测试培养基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH进行调节，直到调节到配方要求的pH值为止。
3、过滤
用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。用纱布过滤时，最好折叠成六层，用滤纸过滤时，可将滤纸折叠成瓦棱形，铺在漏斗上过滤。
4、分装
已过滤的培养基应进行分装。如果要制作斜面培养基，须将培养基分装于试管中。如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基，则须将培养基分装于锥形瓶内。
分装时，一手捏松弹簧夹，使培养基流出，另一只手握住几支试管或锥形瓶，依次接取培养基。分装时，注意不要使培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染。
装入试管的培养基量，视试管和锥形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培养基时，每只15×150毫米的试管，约装3～4毫升（1/4～1/3试管高度），如制作深层培养基，每只20×220毫米的试管约装12～15毫升。每只锥形瓶装入的培养基，一般以其容积的一半为宜。
5、加棉塞
分装完毕后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气，避免污染。棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作，不要用脱脂棉，以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。
制作棉塞时，要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度，揪取手掌心大小一块，铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中，用右手食指插入棉花中部，同时左手食指与姆指稍稍紧握，就会形成1个长棒形的棉塞。
棉塞作成后，应迅速塞入管口或瓶口中，棉塞应紧贴内壁不留缝隙，以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松，塞好后，以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。棉塞的2/3应在管内或瓶内，上端露出少许棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札，准备灭菌。
6、制作斜面培养基和平板培养基
培养基灭菌后，如制作斜面培养基和平板培养基，须趁培养基未凝固时进行。
(1)制作斜面培养基。在实验台上放1支长0.5～1米左右的木条，厚度为1厘米左右。将试管头部枕在木条上，使管内培养基自然倾斜，凝固后即成斜面培养基。
(2)制作平板培养基。将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下棉塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培养皿盖，右手迅速将培养基倒入培养皿中，每皿约倒入10毫升，以铺满皿底为度。
铺放培养基后放置15分钟左右，待培养基凝固后，再5个培养皿一叠，倒置过来，平放在恒温箱里，24小时后检查，如培养基未长杂菌，即可用来培养微生物。
参考资料来源：百度百科—培养基
热心网友
时间：2022-07-01 20:55
培养基的配制：
1、配料：在容器中加入少量水，按照配方称取各种药品，加足所需水量（一药一勺，取药后立即盖上瓶盖）。
2、溶解：淀粉溶解：少量冷水调成糊状，加热溶解，特别是加有琼脂的培养基，一定要煮沸，琼脂的熔解温度95-97℃ ，且需要边加热边搅拌以防止烧焦。
3、调PH：用1N的盐酸或1N的 NaOH把培养基调节到所要求的值。
4、过滤：滤纸或棉花进行过滤。
5、分装：一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。
(1)三角瓶
若作静置培养，则100ml培养基/250ml的三角瓶，最多不能超过150ml培养基/250ml的三角瓶，否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞，造成染菌；若作摇瓶培养，则15-20ml培养基/250ml的三角瓶，保证通气良好。
(2)试管分装
液体培养基一般装4-5ml，约试管的1/4高度。
固体斜面培养基一般装3-4ml，约试管的1/5高度。
6、包扎：分装好后，塞上棉塞，在用牛皮纸将棉塞包裹好，防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。
7、灭菌：按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。如果灭菌的温度太高，营养成分会被破坏，培养基中的糖、氨基酸会使培养基的颜色变深。
8、摆斜面：灭菌后需要摆斜面的试管要趁热斜着摆放，使其凝固成为一个斜面，约占试管长度的1/2。
9、贮存：培养基在30℃下放置一天，无污染的即可使用。一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用。
扩展资料：
培养基，是指供给微生物、植物或动物生长繁殖的，由不同营养物质组合配制而成的营养基质。
一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐、维生素和水等几大类物质。培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质，也是细胞生长和繁殖的生存环境。
配置培养基注意问题：
1、 根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基。
2、 注意各种营养物质的浓度及合适配比，保持合适渗透压 。
3、 将培养基的 pH 控制在适宜的范围之内，以利于不同类型微生物的生长繁殖或代谢产物的积累。
4、要注意各种原料的配比，每种培养基的配比合适的配比，可以按照老师的要求去做。
5、如需要加热的时候注意时间的把握。
参考资料：百度百科—培养基
热心网友
时间：2022-07-01 22:29
1、配制溶液
向容器内加入所需水量的一部分，按照培养基的配方，称取各种原料，依次加入使其溶解，最后补足所需水分。对蛋白胨、肉膏等物质，需加热溶解，加热过程所蒸发的水分，应在全部原料溶解后加水补足。
配制固体培养基时，先将上述已配好的液体培养基煮沸，再将称好的琼脂加入，继续加热至完全融化。并不断搅拌，以免琼脂糊底烧焦。
2、调节pH值
用pH试纸（或pH电位计、氢离子浓度比色计）测试培养基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH进行调节，直到调节到配方要求的pH值为止。
3、过滤
用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。用纱布过滤时，最好折叠成六层，用滤纸过滤时，可将滤纸折叠成瓦棱形，铺在漏斗上过滤。
4、分装
已过滤的培养基应进行分装。如果要制作斜面培养基，须将培养基分装于试管中。如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基，则须将培养基分装于锥形瓶内。
分装时，一手捏松弹簧夹，使培养基流出，另一只手握住几支试管或锥形瓶，依次接取培养基。分装时，注意不要使培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染。
装入试管的培养基量，视试管和锥形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培养基时，每只15×150毫米的试管，约装3～4毫升（1/4～1/3试管高度），如制作深层培养基，每只20×220毫米的试管约装12～15毫升。每只锥形瓶装入的培养基，一般以其容积的一半为宜。
5、加棉塞
分装完毕后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气，避免污染。棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作，不要用脱脂棉，以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。
制作棉塞时，要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度，揪取手掌心大小一块，铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中，用右手食指插入棉花中部，同时左手食指与姆指稍稍紧握，就会形成1个长棒形的棉塞。
棉塞作成后，应迅速塞入管口或瓶口中，棉塞应紧贴内壁不留缝隙，以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松，塞好后，以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。棉塞的2/3应在管内或瓶内，上端露出少许棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札，准备灭菌。
6、制作斜面培养基和平板培养基
培养基灭菌后，如制作斜面培养基和平板培养基，须趁培养基未凝固时进行。
扩展资料
培养基的配置原则：
1、选择适宜的营养物质
总体而言，所有微生物生长繁殖均需要培养基含有碳源、氮源、无机盐、生长因子、水及能源，但由于微生物营养类型复杂，不同微生物对营养物质的需求是不一样的，因此首先要根据不同微生物的营养需求配制针对性强的培养基。
2、营养物质浓度及配比合适
培养基中营养物质浓度合适时微生物才能生长良好，营养物质浓度过低时不能满足微生物正常生长所需，浓度过高时则可能对微生物生长起抑制作用，例如高浓度糖类物质、无机盐、重金属离子等不仅不能维持和促进微生物的生长，反而起到抑菌或杀菌作用。
3、控制pH条件
培养基的pH必须控制在一定的范围内，以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。各类微生物生长繁殖或产生代谢产物的最适pH条件各不相同，一般来讲，细菌与放线菌适于在pH7-7.5范围内生长，酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范围内生长。
4、控制氧化还原电位(redox potential)
不同类型微生物生长对氧化还原电位(F)的要求不一样，一般好氧性微生物在F值为+0.1V以上时可正常生长，一般以+0.3一+0.4V为宜，厌氧性微生物只能在F值低于+0.1V条件下生长，兼性厌氧微生物在F值为+0.1V以上时进行好氧呼吸，在+0.1V以下时进行发酵。
5、原料来源的选择
在配制培养基时应尽量利用廉价且易于获得的原料作为培养基成分，特别是在发酵工业中，培养基用量很大，利用低成本的原料更体现出其经济价值。
6、灭菌处理
要获得微生物纯培养，必须避免杂菌污染，因此对所用器材及工作场所进行消毒与灭菌。对培养基而言，更是要进行严格的灭菌。对培养基一般采取高压蒸汽灭菌，一般培养基用1.05kg/cm2，121.3℃条件下维持15-30min可达到灭菌目的。
参考资料来源：百度百科—培养基
热心网友
时间：2022-07-02 00:21
虽然培养基的种类较多，但制备过程和步骤基本一致。大致的配制程序如下：
1.根据组成准确称取，混悬于装有蒸馏水烧瓶中，加热溶解；
2.调整培养基的pH；
3.过滤澄清；配制好的培养基，会产生沉淀或混浊，需要过滤澄清，有利于细菌生长的观察。
4.分装：制成的培养基根据实际使用的需要，进行分装。在试管中可制成琼脂斜面、半固体培养基、琼脂高层、液体培养基等；基础培养基可装成大瓶储存备用。有些培养基需要在灭菌后进行无菌分装，如琼脂平板等。
5.灭菌：制成的培养基必须灭菌处理后才能使用。根据培养基的成分、性质不同采用不同的灭菌方法，常用的灭菌方法有高压蒸气灭菌法、流通蒸气间歇灭菌法和血清凝固器灭菌法等。
6.质量检查 凡制成的培养基必须经过质量检查合格后方能使用。至少要进行无菌试验和效能检测。
7.保存 制备好的培养基，应注明名称、制备日期，存放于冷暗处或4℃冰箱中。平板应倒置。培养基的保存不宜过久。
热心网友
时间：2022-07-02 02:29
（2）
往烧杯加入适量蒸馏水或无菌水.
（3）
将药品放入烧杯内,并用玻璃棒搅拌使其溶解,难溶时可适当加温以加速溶解.
（4）
要待一种药品完全溶解后再加入下一种药品.
（5）
所加入的药品应依次加入，直至药品全部加入溶解为止。
例MS母液的配制
按MS培养基成分表，将各种化学物质归成几大类，分别为大量元素、微量元素、铁盐、有机物。
大量元素10倍液(mg/L)微量元素1000倍液（mg/L）有机物100倍液（mg/L）铁盐NH4NO3
1,6500
KNO3
1,9000
CaCl2?2H2O
4,400
MgSO4?7H2O
3,700
KH2PO4
1,700HBO3
6,200
MnSO4?4H2O
22,300
ZnSO4?7H2O
8,600
KI
830
Na2MoO4?2H2O
250
CuSO4?5H2O
25
CoCl2?6H2O
25甘氨酸
200
肌醇
10,000
烟酸
50
维生素B6
50
维生素B1
405.57g
FeS04?7H2O和7．45g
Na2一EDTA溶于1升蒸馏水里，用时每配1升MS培养基取5ml。取烧杯注入约600ml蒸馏水,按顺序加入药品并使其溶解,最后加蒸馏水定容至1000ml。取烧杯注入约600ml蒸馏水,按顺序加入药品并使其溶解,最后加蒸馏水定容至1000ml。
2．
培养基制备
配制流程见图1-2，其顺序是：
①
取烧杯或三角瓶注入一定量的蒸馏水，将各种母液按所需容积分别用移液管吸取并混合在一起，然后按要求加入一定量的激素、蔗糖后定容至一定体积。
②
用1mol/L的NaOH或HCl调节pH
③
如制固体培养基，则加入1%左右的琼脂后加热煮沸，使其熔化。
④
分装，可用漏斗将液状培养基注入培养瓶，注入量视培养瓶容量大小而定，通常为容器的1/5左右。
⑤
封瓶口。
⑥
高压蒸汽灭菌。120℃，1.5Mpa,消毒15～20min。注意压力不能太大，时间也不宜过长，否则蔗糖、有机物特别是维生素类物质会在高温下分解，影响培养基的酸碱度，琼脂也会分解，颜色变深且不易凝固。
⑦
灭菌后的培养基可放入接种室内静置，让其降温后凝固，如需斜面可将其斜放。
热心网友
时间：2022-07-02 04:53
用灵敏度为0.1mg的天平称取药品.
（2）
往烧杯加入适量蒸馏水或无菌水.
（3）
将药品放入烧杯内,并用玻璃棒搅拌使其溶解,难溶时可适当加温以加速溶解.
（4）
要待一种药品完全溶解后再加入下一种药品.
（5）
所加入的药品应依次加入，直至药品全部加入溶解为止。
例
MS母液的配制
按MS培养基成分表，将各种化学物质归成几大类，分别为大量元素、微量元素、铁盐、有机物。
大量元素10倍液(mg/L)
微量元素1000倍液（mg/L）
有机物100倍液（mg/L）
铁盐
NH4NO3
1,6500
KNO3
1,9000
CaCl2?2H2O
4,400
MgSO4?7H2O
3,700
KH2PO4
1,700
HBO3
6,200
MnSO4?4H2O
22,300
ZnSO4?7H2O
8,600
KI
830
Na2MoO4?2H2O
250
CuSO4?5H2O
25
CoCl2?6H2O
25
甘氨酸
200
肌醇
10,000
烟酸
50
维生素B6
50
维生素B1
40
5.57g
FeS04?7H2O和7．45g
Na2一EDTA溶于1升蒸馏水里，用时每配1升MS培养基取5ml。
取烧杯注入约600ml蒸馏水,按顺序加入药品并使其溶解,最后加蒸馏水定容至1000ml。
取烧杯注入约600ml蒸馏水,按顺序加入药品并使其溶解,最后加蒸馏水定容至1000ml。
2．
培养基制备
配制流程见图1-2，其顺序是：
①
取烧杯或三角瓶注入一定量的蒸馏水，将各种母液按所需容积分别用移液管吸取并混合在一起，然后按要求加入一定量的激素、蔗糖后定容至一定体积。
②
用1mol/L的NaOH或HCl调节pH
③
如制固体培养基，则加入1%左右的琼脂后加热煮沸，使其熔化。
④
分装，可用漏斗将液状培养基注入培养瓶，注入量视培养瓶容量大小而定，通常为容器的1/5左右。
⑤
封瓶口。
⑥
高压蒸汽灭菌。120℃，1.5Mpa,消毒15～20min。注意压力不能太大，时间也不宜过长，否则蔗糖、有机物特别是维生素类物质会在高温下分解，影响培养基的酸碱度，琼脂也会分解，颜色变深且不易凝固。
⑦
灭菌后的培养基可放入接种室内静置，让其降温后凝固，如需斜面可将其斜放。
热心网友
时间：2022-07-02 07:51
2.若干粉培养基结块或颜色发生改变，不得使用。
3.配制用水可用蒸馏水、去离子水等，电阻率不小于30万Ω•cm，每批应检查一次。
4.称量干粉培养基时为避免污染，可用专用角匙。
5.自行配制的培养基，各营养成分应按要求顺序加入，避免产生沉淀。
6.盛放培养基的容器不宜用铜或铁锅，以防其离子混入培养基影响微生物生长。
7.称量好的干粉培养基应先溶解再高压灭菌。
8.自行配制的培养基应完全溶解后再调PH。PH值须冷后测定，因培养基所含成分不同，对冷的和热的进行测定，其PH值相差很多。培养基的PH值须精确测定，否则会影响微生物的生长和反应地观察。另外，PH值不可反复调试，否则会影响培养基的渗透压。
9.需要加热煮沸的培养基应避免溢出，应边搅拌边加热。烧糊的培养基，其成分已改变，不得使用，应重配。
10.不须高压灭菌的培养基，配制用水及盛放的容器可于配制前先进行高压灭菌。
11.配制好的培养基一般采用高压灭菌，且应立即灭菌，以防微生物生长消耗养分而改变培养基成分。
12.压力蒸汽灭菌器应定期检定，平时可用生物指示菌法和化学变色纸片进行灭菌验证。灭菌时应注意排除冷空气。含糖或特殊培养基应按要求选好灭菌温度及时间。
13.灭菌后的培养基应迅速冷却到所须温度，避免长时间保存在灭菌锅中，造成过度灭菌，影响培养基的营养成分或选择性效果。
14.配制的培养基的量应恰当，未用完的可注明配制日期，并且应该在最长保值期内用完。配好的培养基应避光、冷藏保存防止蒸发。
15.凡受污染长过细菌的培养基，不得灭菌再用。
16.三(双)糖铁琼脂斜面试管塞不宜塞的过紧，否则容易影响斜面碱性反应;LST如果试管塞过紧，影响排气，可导致灭菌后小倒管内仍有气泡。
17.需要加添加剂或抗生素的培养基应即配即用。
18.固体培养基如储存太久，使用前应再加热一次，使其表面湿润以利细菌生长。
