求助诱导细胞凋亡，Annexin

发布网友发布时间：2023-11-05 12:56

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热心网友时间：2024-12-14 23:44

1、必须活细胞检测,不能用能破坏细胞膜完整性的固定剂和穿透剂固定或穿膜.
2、特殊细胞的染色方法：在消化或吹打时,有些细胞（如神经元细胞）很容易受到损伤,导致晚期凋亡或坏死比例非常高,不能反映真实结果.实验的解决方法：先低速离心,吸取细胞培养板中的液体,留少许液体,加入适量PI和Annexin-V染色10min后,将漂浮细胞吸至离心管中,离心洗涤两次,用PBS漂洗贴壁细胞两次,加胰酶消化后将细胞悬液移至另一离心管中,离心洗涤,再与漂浮细胞合并后上流式细胞仪检测.应用该法可降低晚期凋亡和坏死比例,增加早期凋亡细胞比例.
3、由于Annexin-V为钙离子依赖的磷脂结合蛋白,只有在钙离子存在的情况下与PS的亲和力才大,因而在消化细胞时,建议一般不采用含EDTA的消化液.
4、必须设置阴性对照和补偿对照（分别单染）.