大家做ttc染色的经验 可以分享一下吗
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发布时间：2022-04-28 14:23
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时间：2022-06-19 03:36
实验操作步骤2 — 脑梗塞面积TTC染色
一、原理
TTC（2，3，5—氯化三苯基四氮唑）是脂溶性光敏感复合物，1894年首次合成用来检测种子的生存能力，1958年开始用来染色检测哺乳动物组织的缺血梗塞。它是呼吸链中吡啶—核苷结构酶系统的质子受体，与正常组织中的脱氢酶反应而呈红色，而缺血组织内脱氢酶活性下降，不能反应，故不会产生变化呈苍白色。
二、操作方法与步骤
动物深度过量麻醉（600mg/kg 10%水合氯醛 I.P.）以后，心内灌注N.S（生理盐水）100ml，断头快速取脑，将脑组织在0oC的冰生理盐水中冰冻5分钟后，由前极向后冠状每隔2mm切片，切片置于含2%TTC的0.2M磷酸缓冲液（PH 7.4）中，37oC避光孵育30分钟后，在10%的中性*溶液中固定。
八个层面切片的解剖标志（Anatomical landmarks）：
1，Olfactory tract 嗅束 2，Nucleus accumbens
3，Septal nuclei 4，Globus pallis 苍白球
5，Anterior hypothalamus 下丘脑前部 6，Lateral habenula 缰
7，Medial geniculate 内侧膝状体 8，Aquect 导水管
三、测量
数码相机拍摄图象后，利用PhotoShop软件分析出梗塞面积的体积百分比（详细见Quantification of infarct size on focal cerebral ischemia model of rats using a simple and economical method. Journal of Neurosci Methods 1998;(84):9-16.）
附：0.2M磷酸缓冲液（PH 7.4）的配制
1M磷酸氢二钠 (Na2HPO4) [35.8g Na2HPO4•12H2O加蒸馏水到100ml]
77.4 ml
+
1M磷酸二氢钠（NaH2PO4) [15.6g NaH2PO4 加蒸馏水到100ml]
22.6 ml
配制成100 ml
1M的磷酸缓冲液（PH 7.4） 再将其稀释到0.2M。
