沉淀DNA时,用到的醋酸铵溶液pH是多少

发布网友发布时间：2022-04-27 03:51

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热心网友时间：2022-06-25 18:38

沉淀DNA时，用到的醋酸铵溶液pH在8左右，略微碱性。

DNA的沉淀：
采用无水乙醇沉淀DNA是实验室的常用方法。

在DNA溶液中，DNA分子与水分子呈水合状态，当加入乙醇后，乙醇可以夺去DNA分子周围的水，从而使得DNA分子失水而易于聚合。乙醇的优点是可以任意比和水融合，而且不会和DNA发生化学反应，DNA分子在乙醇中能够稳定保存，因此可以作为沉淀DNA的良好试剂。

一般用2倍体积的无水乙醇沉淀DNA,使乙醇最终含量为67%左右（关键）。当沉淀RNA时一般用2.5倍的体积。因此也可以用95%的乙醇等代替，但是此时终体积将会较大，且DNA在溶液中会有一定的损耗。因此当多次沉淀时，做好采取折中的方法，即初次用95%的乙醇沉淀后，之后采用无水乙醇代替。
另外也可以用0.6倍体积的异丙醇（IPA）沉淀。与乙醇相比，异丙醇比较疏水，极性较弱，因此盐离子会与DNA分子共沉淀，不利于去盐，但却因此可以去除蛋白质、糖等杂质（高浓度的盐可以使糖存在于溶液中从而去除）。而乙醇可以有效去除盐离子。另外，乙醇易挥发，所以通常会先用异丙醇沉淀，再用乙醇多次洗去盐。

沉淀时间一般是15-30分钟即可。
沉淀过程中一般会加入醋酸钠或氯化钠，因为在pH为8时，DNA分子带负电荷，盐释放的正电荷可以与其反应，从而促进其聚合沉淀。当然盐离子浓度也不可太高，否会影响后续反应，如酶切等，故得多次脱盐。