血球计数板的使用方法
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发布时间：2022-05-14 19:06
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时间：2023-10-25 06:28
（1）构造：血球计数板是一块特制的载玻片，它的上表面有4条下凹的槽，构成3个平台，中间的平台又被一短横槽隔为两半，每半边各有一个方格网，每个方格网上有9个大小相等的大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供微生物计数用，这一大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其体积为0.1mm3。
（2）规格：
一种是大方格内分为25中方格，每一中格又分为16小方格；另一种是大方格内分为16中方格，每一中方格又分为25小方格。但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成，见图：
（3）使用方法
①取清洁干燥的血球计数板，加盖玻片盖住网格和两边的槽。
②将待测菌液充分摇匀后，用无菌吸管吸少许，由盖玻片边缘或槽内加入计数板，使其自行渗入计数室内，计数室内不能有气泡。静置5-10分钟。
③在低倍镜下找到小方格网后更换高倍镜观察计数，上下调动细螺旋，以便看到小室内不同深度的菌体。位于分格线上的菌体，只数两条边上的，其余两边不计数。即数上线就不数下线，数左边线就不数右边线。
④计数时，若使用刻度为25中方格×16小方格的计数板，计数四个角的4个中方格，及*1个中方格的菌数（即80小方格）；若使用刻度为16中方格×25小方格的计数板，就数四个角的4个中方格（即100小方格）内的菌数。每小方格中菌数以5-10个为宜，如菌液过浓可适当稀释。
⑤每个样品重复计数2-3次，取其平均值，按下式计算样品中的菌数。
刻度为25中方格×16小方格的计数板：
刻度为16中方格×25小方格的计数板：
⑥试验结束后要清洗和整理试验用具，特别注意血球计数板不能用试管刷蘸洗涤剂擦洗，正确的做法是浸泡和冲洗，洗后自行晾干或用吹风机吹干。通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物，若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。
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时间：2023-10-25 06:28
．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍），以每小格的菌数可数为度。 2．取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。
3．将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。 4．静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。
5．计数时若计数区是由16个大方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的菌数。如果是25个大方格组成的计数区，除数上述四个大方格外，还需数*1个大方格的 血球计数板 血球计数板
菌数（即80个小格）。为了保证计数的准确性，避免重复计数和漏记，在计数时，对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定。如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中。见右图：即本格中计数细胞为3个。
6．对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2-3次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作），按公式计算出每mL（g）菌悬液所含细胞数量。
7．测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。
红细胞计数公式
红细胞数/L=N*25/5*10*10^6*200 N为：五个中方格的RBC总数 N*25/5为：*大方格RBC总数（即：0.1mm（ul）的RBC总数） N*25/5*10为：1mm（ul）RBC总数 N*25/5*10*10^6为：1L的RBC总数 *200为血液的稀释倍数 公式简化后：红细胞数/L=N/100*10^12
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时间：2023-10-25 06:29
2mm×2mm表示计数室的边长，即一个大方格的边长。由于计数室厚度为0.1mm，所以计数区的总体积为0.4mm3。
计数室通常也有两种规格：一种是16×25型，即大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是25×16型，即大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成。
1．16×25型的计数公式为：
酵母细胞个数／1mL=100个小方格细胞总数/ 100 ×100×10000×稀释倍数
2．25×16型的计数公式为：
酵母细胞个数／1mL ＝80个小方格细胞总数/ 80 ×100×10000×稀释倍数
二、1mm×1mm方格的计数
1．16×25型的计数公式：
酵母细胞个数／1mL=100个小方格细胞总数/ 100 ×400×10000×稀释倍数
2．25×16型的计数公式：
酵母细胞个数／1mL＝80个小方格细胞总数/ 80 ×400×10000×稀释倍数
三、问题讨论
若所使用的计数工具为2mm×2mm，刻度为25中格×16小格，在装入液体后，液体高度为0.1mm。若观察到每个小格中的平均酵母菌数为A个，且已知酵母菌培养稀释倍数为B，则原1mL培养液中的酵母菌数为
个。
（参*：A×100×10000×B）
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