革兰氏染色

发布网友发布时间：2022-05-15 21:38

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革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师Gram创立。未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察。染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。革兰氏染色属复染法。
原理
通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。

步骤　　革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：

　　1）涂片固定。

　　2）草酸铵结晶紫染1分钟。

　　3）自来水冲洗。

　　4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。

　　5）水洗，用吸水纸吸去水分。

　　6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。

　　7）蕃红染色液（稀）染2分钟后，自来水冲洗。干燥，镜检。