1.工程菌的问题，可能携带的质粒已经丢失，工程菌不具有抗性，建议在诱导前先检测一下质粒稳定性.2.活化诱导时加入的抗生素过低未加或失效，扩大培养时加入抗生素又过量，建议重新配制抗生素，这条也比较勉强。3.加入的IPTG浓度过高.4.培养基的问题，营养不足. ，这条不会！5.噬菌体污染，导致菌体降解...

一般是将菌摇到OD600=0.4-0.6，然后加入终浓度1mM的IPTG（这个一般不变，诱导不出来再考虑适当多加点，例如2-5mM），但是诱导时间和诱导温度根据诱导蛋白大孝性质的不同而不同，需要摸索的，你可以做个预实验，隔两个小时取样，最后SDS-PAGE，寻。

一般是将菌摇到OD600=0.4-0.6，然后加入终浓度1mM的IPTG（这个一般不变，诱导不出来再考虑适当多加点，例如2-5mM），但是诱导时间和诱导温度根据诱导蛋白大孝性质的不同而不同，需要摸索的，你可以做个预实验，隔两个小时取样，最后SDS-PAGE，寻。

8. 取20ul转化产物加160ulSOC涂板，放于37℃温室，过夜培养，次日查看转化结果。其余菌液加1：1的30％的甘油后混匀－80℃保存。注：每块加有Amp的平板上均匀涂有X-Gal 80μl ，SOC 80μl，IPTG 20 μl.四、电击杯清洗流程 1.用清水将电击杯稍冲一下。2.向电击杯中加入的75%酒精浸泡2hr...

噬菌体有烈性的和非烈性噬菌体。烈性的噬菌体侵染细菌后会快速造成细菌菌体裂解，培养液呈现清凉透明有破碎残渣。非裂解性的可以铺顶层琼脂板（可以查阅噬菌体滴度的测试实验方案），培养后看顶层琼脂层中有没有噬菌斑，也可以在底层培养基中加些IPTG/X-gal若噬菌体带有lacZ的还有蓝白斑筛选的作用（如...

为了获得h－bFGF高效表达的最佳条件，进行了摇瓶试验。在IPTG诱导作用下，h－bFGF可以分泌到胞浆中，采用连续流加葡萄糖的高密度分批发酵工艺，经11h发酵可以获得菌体光密度值（OD值）达38，产量达200mg／L和h－bFGF。

1． 所用器具一定要清洁；2． 操作步骤2 中培养基的装量也是很重要的，建议装量不要高于此值：500ml 锥形 瓶装100ml培养基，250ml锥形瓶装50ml培养基；3． 在收获菌体前半小时还可以在培养基中加入20mM的MgCl2 ，效果会更好一些； 4． 为保证细胞处于对数生长期，培养后的菌体的OD值不要高于0....

菌体破碎之后跑胶，对照和实验组你说的是上清还是沉淀？还有会不会你的蛋白抑菌效果很显著，微量就可以抑菌，所以细菌表达了一点点就死了，所以跑胶看不出差异。

1． 所用器具一定要清洁；2． 操作步骤2 中培养基的装量也是很重要的，建议装量不要高于此值：500ml 锥形 瓶装100ml培养基，250ml锥形瓶装50ml培养基；3． 在收获菌体前半小时还可以在培养基中加入20mM的MgCl2 ，效果会更好一些； 4． 为保证细胞处于对数生长期，培养后的菌体的OD值不要高于0....

方法一：细菌转化的方法多以Mendel和Higa（1970）的发现为基础，其基本方法是用冰预冷的CaCl2或多种2价阳离子等处理细菌，使之进入感受态得以转化。用CaCl2制备新鲜或冷冻的大肠杆菌感受态细胞，常用于成批制备感受态细菌。本法适用于大多数大肠杆菌菌株，且迅速、重复性好。操作过程简述如下。1．从37℃...