任天堂明星大乱斗一共有64个角色。一共有64个角色，其中皮卡丘最受玩家的喜爱。名单有：里奥(马力欧)、森喜刚(大金刚)、林克、萨姆斯、耀西、卡比、火狐、皮卡丘、路易吉、奈斯、飞隼队长、胖丁、桃花公主、菊花公主、酷霸王、翻越冰山者(雪人兄弟)、希克、塞尔达、马里奥医生(马力欧医生)、皮丘、佛克、马尔斯、露琪娜、幼年林克、盖侬多夫、超梦、罗伊、Mr.Game&Watch、魅塔骑士、彼特、黑暗彼特、零装甲萨姆斯、瓦力欧、SNAKE、艾克第、宝可梦训练家(杰尼龟、妙蛙草、喷火龙)、迪迪刚、卢卡斯、索尼克、帝帝帝大王、皮克敏和欧力马、路卡利欧、机器人、卡通林克、沃鲁夫、村民、洛克人、WiiFit教练、罗莎塔和琪琪、小麦克、甲贺忍蛙、Mii斗士(格斗、剑术、射击)、帕露蒂娜、吃豆人、鲁弗莱、修尔克、酷霸